支原体是一种常见的原核生物,常常在实验室中污染细胞。其污染源主要包括细胞、毒种、血清、鸡胚及其他动物性原材料,甚至操作人员自身。数据显示,约有15%-35%的细胞受到了支原体的污染。支原体不仅会改变宿主细胞的结构和功能,还可能导致实验结果的不准确、细胞代谢和生长的干扰、核酸合成的变化、细胞抗原性的影响以及染色体的改变,甚至干扰病毒的复制。因此,检测并清除支原体对确保细胞培养的质量至关重要,可以说若要细胞培养得好,支原体的去除是必不可少的。
在去除细胞支原体污染时,第一个挑战在于如何有效检测细胞中可能存在的支原体。支原体属于无细胞壁的原核微生物,直径约为0.1-0.3μm,通用的革兰氏染色方法对于识别支原体并不适用,且在光学显微镜下难以观察。另外,某些支原体如口腔支原体可以与宿主细胞建立潜伏感染,不会引起明显的细胞病变,因此难以发现。
传统支原体检测方法包括培养法和指示细胞法,但这两种方法耗时较长且培养条件苛刻,同时过程容易受到污染,导致检测结果误差。随着生命科学的进展,如今已有更高效、更准确的检测措施可以取代传统方法。《欧洲药典》中第267条指出,在适当验证后,核酸扩增技术(NAT)可以替代培养法和指示细胞法。NAT法的灵敏度高且耗时较短。而生化检测方法亦能基于支原体特异性激酶的表达情况,仅需20-30分钟即可完成对支原体的检测,其灵敏度接近NAT法,更适合进行快速检测。
支原体检测方法对比
检测方法 | 时间 | 灵敏度 |
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培养法 | 28天 | 10 cfu/mL |
指示细胞法 | 4-5天 | 100 cfu/mL |
NAT(核酸扩增技术) | 2-5小时 | 10 cfu/mL |
生化法 | 20分钟 | 50 cfu/mL |
强大的新葡萄8883官网AMG针对支原体检测,推出了两款快速检测产品,分别基于NAT和激酶生化检测技术,能够在半小时内完成检测,其灵敏度高达10 cfu/mL,助力快速识别支原体污染。
第一款产品是abs90062一步法快速支原体检测试剂盒(等温扩增法),采用等温扩增技术结合可视化颜色变化,快速检测细胞培养液中的8种常见支原体。该产品具有以下特点:1. 灵敏度高的等温扩增技术;2. 操作简单,无需PCR仪;3. 实验快速,30分钟即可完成;4. 结果可视化,无需检测仪器。
第二款产品为abs90283 MYCO-LTM荧光素酶支原体检测试剂盒,可以特异性地检测活支原体产生的真核细胞不表达的激酶,这些激酶能够将ADP转化为ATP。该产品同样能够在30分钟内快速检测多个常见的活支原体,并具备:1. 高灵敏度的生物发光检测;2. 简单的均相反应与双次读数;3. 30分钟即可完成实验;4. 高信噪比,优于进口品牌。
除了以上检测试剂外,新葡萄8883官网AMG还提供全套支原体预防和清除试剂,以帮助用户远离支原体带来的困扰。其产品包括:多肽类无抗药性的支原体清除剂、天然抗生素的支原体清除剂及能快速根除支原体的清除喷剂。
针对细胞培养的支原体污染防控,需贯穿“检测-清除-预防”的全流程。建议每次细胞传代后进行定期检测,并在发现污染后立即使用清除试剂进行应急处理。同时,定期使用专用消毒剂处理培养箱和超净台等环境控制,对血清等耗材要严格质检。通过专业化的检测产品与标准化操作流程,能够有效构建细胞培养的支原体防护屏障,保障科研实验的稳定性与可靠性。
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