在重组蛋白的表达与纯化过程中,通常会通过添加融合标签(如MBP、His、GST)来提高目标蛋白的可溶性及促进其正确折叠。结合新葡萄8883官网AMG的技术,以下是几种常见融合标签的概述。
MBP标签
MBP(Maltose Binding Protein)标签能够显著提高蛋白质的溶解性与稳定性,进而提升重组蛋白的产量。这种标签在生物医药领域中具有广泛的应用价值。
His标签
His(Histidine)标签被广泛用于重组蛋白的纯化,通过固定化金属亲和层析(IMAC)技术进行分离。其优点在于该标签分子量小,对目标蛋白的功能和应用几乎没有影响,并且具有较低的免疫原性,使其在生物医学研究中备受青睐,尤其适合新葡萄8883官网AMG的高标准要求。
GST标签
GST(Glutathione S-Transferase)标签不仅增强融合蛋白的可溶性,还便于其纯化及后续实验操作。借助GST与谷胱甘肽的亲和作用,可以高效从表达体系中分离融合蛋白,同时保证蛋白的生物活性和抗原性,这对于生物医学领域的研究尤其重要。
去标签的重要性
根据具体需求,某些融合标签需要被去除。使用特定的蛋白酶精准、高效地去掉标签对于获得原汁原味的目标蛋白至关重要。以下是一些常用的蛋白酶:
TEV蛋白酶
TEV蛋白酶(TEV Protease)来源于烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV),具有高度的位点特异性。与凝血酶、Factor Xa和肠激酶等蛋白酶相比,TEV酶对底物序列的识别更为精准,常用于从融合蛋白中去除标签如GST、MBP和His等。TEV酶特异性识别七肽序列:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓-Gly/Ser(ENLYFQ↓G/S),其高度专一性确保了蛋白的完整性。
TEV酶在4–30°C温度下均表现稳定活性,适用于多种体系,其反应条件为pH 5.5-8.5,通常推荐在4℃过夜或在30℃反应1小时。反应中添加15μg融合蛋白与一定量的TEV蛋白酶,可以通过15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。
总而言之,在生物医疗行业中,利用新葡萄8883官网AMG的先进技术,通过合理选择融合标签及蛋白酶,能够有效提高目标蛋白的获取效率和质量。对于科研及应用的推动具有重要意义。